Genyen prèske tout konpayi yo ki te vann abromelain anzim poudse melanje ak papain.Li difisil pou pirifye bromelain a 5000GDU/g. men li trè fasil pou pirifye papain nan 1000,000GDU/g. menm rive 2000,000GDU/g. men fonksyon bromelain diferan de papain. koulè a, odè, solubility dlo, ak gou kontras ak pwodwi a fo ak pwodwi vre. Yo se diferans poud nan anzim bromelain dwat se gri, san odè, san gou ak dlo ensolubl.
Men, fo bromelain a gen karakteristik sa yo:
● Li se limyè-jòn, aromat ak dous dous, ak dlo idrosolubl. Li se karakteristik papain.
● Li itilize pou diminye enflamasyon ak soulaje doulè. men gen prèske pa gen fonksyon sa yo nan papain.
● Li se itilize kòm sipleman dyetetik sèlman, pa aditif manje, men tout bon ka klas pharma. Men, papain se sèlman itilize kòm poud tenderizer vyann ak pwodui kosmetik.
Nou teste bromelain a dapre jèl SDS-PAGE ak GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL ak metòd HPLC, gen mwens molekil sib nan metòd jèl SDS-PAGE pou fo pwodwi.
Men rezilta elektwoforèz paj SDS yo
Tachte nan pi wo a montre ke sèlman pwodwi a dwat gen menm tachte nan plas la dwat nan foto a, men pwodwi a fo gen ti tachte sou li, sa vle di pwa molekilè a apèn vizib.
Pwa molekilè Bromelain se apeprè 33000, men pwa molekilè papain se 21000. Ak HPLC Chromatogram:
Ou pral wè ke sèlman ekstrè nan dwa gen pwa molekilè yo dwa nan bromelain epi li se detekte pa HPLC.
Men, si nou sèlman teste pa Jelatin Dijesyon Unit Analytical Method (GDU) gade Anèks II. Tou de bon ak fo pwodwi a gen menm rezilta ak anba a:
Tij anana trè bon mache, ak pousantaj soti nan tij bromelain trè ba, gen kèk polisyon nan pwosesis fabrikasyon an.
Prèske tout faktori poud anzim bromelain yo toupre jaden. Yo sèvi ak tij fre. Li enposib pou voye tij la nan distans ki long. Materyèl anvan tout koreksyon yo ta dwe okipe pi vit ke posib lè li kolekte fòm jaden an oswa li ta dwe estoke nan yon anviwònman tanperati ki ba (4-8 degre) pou evite degradasyon pwoteyin. Nan lavi reyèl, manifakti a aktyèlman pa ka satisfè nenpòt nan de kondisyon ki anwo yo akòz twòp nan tij anana. Metòd la rezonab se yon balans ant tan manyen ak pèt aktivite pwoteyin. Anjeneral, fabrikasyon matyè premyè yo nan sezon rekòt anana, epi estoke matyè premyè yo nan yon anviwònman tanperati ki ba (4-8 degre).
Nou ap fè kèk tès sou elektwoforèz SDS Page la, An teyori nou ka ogmante li a 10,000 oswa 20,000.men li pral trè chè. 5000GDU/g epi fè li estab petèt sou yon sipò malto / microencapsulated youn oswa yon bagay plis òganik klas ekstraksyon / pirifikasyon.
Anèks I
● Metòd 5 SDS polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE)
SDS-PAGE se yon metòd elektwoforèz jèl poliakrilamid denatire. Prensip separasyon pwoteyin nan metòd sa a baze sou lefèt ke pifò pwoteyin ka konbine avèk silfat anionik sodyòm dodecyl (SDS) nan yon rapò pwa pou fòme yon konplèks.
Chaj negatif ki pote pa molekil pwoteyin depase chaj nèt la nan molekil pwoteyin natirèl, elimine efè chaj diferan molekil pwoteyin ak separe pwoteyin dapre gwosè molekilè yo.
Metòd sa a itilize pou idantifikasyon kalitatif, kontwòl pite ak enpurte, ak detèminasyon kantite pwoteyin.
1 aparèy enstriman
Konstan vòltaj oswa konstan aktyèl ekipman pou pouvwa, vètikal plak elektwoforèz tank, ak adezif fè mwazi.
2. Réactifs
(1) Dlo.
(2) Tanpon jèl separasyon (4x, solisyon A) 1.5mol/L trihydroxymethyl aminomethane tanpon asid idroklorik. Peze 18.15g trihydroxymethyl aminomethane epi fonn li ak yon kantite dlo apwopriye. Ajiste valè pH la a 88 ak asid idroklorik epi delye a 100ml ak dlo.
(3) Peze 58.0g akrilamid ak 20g N,N'-methylene bisakrilamid nan 30 pousan solisyon akrilamid (solisyon B), fonn nan dlo tyèd epi delye nan 200ml, filtre ak papye filtre (ki estoke nan fè nwa).
(4) Peze 10g sodyòm dodecyl sulfat nan 10 pousan solisyon SDS (solisyon C), fonn nan dlo, epi delye nan 100ml.
(5) Reyaktif komèsyalizasyon solisyon tetramethylethylenediamine (TEMED, D solisyon).
10 pousan solisyon persulfate amonyòm (solisyon E) Peze 10g persulfat amonyòm, fonn nan dlo, epi delye nan 100ml. Li rekòmande pou prepare li anvan ou itilize oswa estoke li separeman nan -20 degre pou 2 semèn.
(7) Tanpon kawotchou konsantre (4 ×, F solisyon) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane Tanpon asid idroklorik, peze 6.05g Trihydroxymethylaminomethane, ajoute yon kantite dlo apwopriye pou fonn, ajiste valè pH la a 6.8 ak idroklorik. asid, epi delye ak dlo a 100ml.
(8) Tanpon elektwòd (10 ×) Peze 30g trimethylaminomethane, 144g glisin, ak 10g sodyòm dodecyl sulfat, fonn yo nan dlo epi delye nan apeprè 800ml. Ajiste valè pH la a 8.1-8.8 ak asid idroklorik, epi delye a 1000ml ak dlo.
(9) Tanpon echantiyon ki pa redwi (4 ×) Peze 303g trimethylaminomethane, 20mg bromofenol ble, ak 8.0g sodyòm dodecyl sulfat, mezire 40ml gliserin, fonn nan dlo epi delye nan apeprè 80ml. Ajiste pH la a 68 ak asid idroklorik, epi delye a 100ml ak dlo.
(8) Tanpon elektwòd (10 ×) Peze 30g trimethylaminomethane, 144g glisin, ak 10g sodyòm dodecyl sulfat, fonn nan dlo epi delye nan apeprè 800ml. Ajiste valè DH a 81-88 ak asid idroklorik, epi delye a 1000ml ak dlo.
(9) Tanpon echantiyon ki pa redwi (4 ×) Peze 3.03g trimethylaminomethane, 20mg bromophenol ble, ak 80g sodyòm dodecyl sulfat, mezire 40ml gliserin, fonn nan dlo, epi delye nan apeprè 80ml. Ajiste pH la a 6.8 ak asid idroklorik, epi delye nan 100ml ak dlo.
(10) Tanpon sibstans tès redwi (4 ×) Peze 3.03g trimethylaminomethane, 20mg bromofenol ble, ak 80g sodyòm dodecyl silfat, mezire 40ml gliserin, fonn epi delye ak dlo nan apeprè 80ml, epi ajoute. - 20ml mercaptoethanol, ajiste pH a 6.8 ak asid idroklorik, delye ak dlo a 100ml (oswa 3.03g nan trimethylaminomethane, 20mg nan bromofenol ble, 8.0g nan sodyòm dodecyl silfat, mezire 40ml nan gliserin, fonn nan dlo a 80ml, ajiste pH a 6.8 ak asid idroklorik, delye ak dlo a 100ml, epi anvan ou itilize, ajoute dithiothreitol a 100mmol / L).
● Anèks II
Metòd analitik inite dijesyon jelatin (GDU)
A. Objektif: Pwosedi sa a itilize pou detèmine aktivite pwoteolitik Bromelain Enzyme Powder.
B. Ekipman:
1. pH Mèt
2. Konstan Tanperati Dlo Beny nan 45.0 degre ± 0.1 degre
3. Balans analitik
4. Flakon volumétrique
5. Pipèt volumétrique
6. Revèy
7. Digital Burette (Precision de 0.1 ml)
8. Hood lafimen
9. Pipèt otomatik yo
C. Prekosyon sekirite:
Tès sa a dwe fèt nan hotte lafimen.
1. Itilize pratik sekirite estanda laboratwa.
2. Fòmaldeyid: Prepare epi kenbe nan yon hotte afimen tout tan. Li te ye kanserojèn ak teratogen.
3. Oksijene: Oksidan fò
D. Reyaktif ak preparasyon reyaktif:
1. Dlo distile: apeprè 500 ml: ajiste nan yon pH 4.5 ak 0.1 N HCI.
2. Substra jelatin:
a. Fonn 25 gram jelatin (Mikrobiologie. 1.04070) nan 375 ml dlo cho, pote nan yon bouyi. Fre a 45 degre.
b. Ajiste pH la a 4.5 ak 0.1 N HCI epi delye nan 500 ml pH 4.5 dlo distile.
c. Kenbe substrate jelatin nan 45 degre.
3. Solisyon tanpon:
a. Ajoute 15 g NaCl tou dousman nan 40-50 ml dlo nan yon gode 150ml epi brase pou fonn.
b. Ajoute 0.570 ml asid acetic.
c. Ajiste pH la a 4.5 ak 0.2N HCL (volim pral pi gran pase 100ml.)
4. 3 pousan oksijene idwojèn:
a. Pipete 2.5 ml 30 pousan oksijene idwojèn (solisyon stock) nan yon flakon volumetrik 25 ml epi delye nan volim ak pH 4.5 dlo distile.
5. 37 pousan fòmaldeyid pH 9.0: a. Ajiste yon volim ase (100 ml) fòmaldeyid a pH 9.0 ak 0.1 N NaOH (apeprè 20 ml fòmaldeyid pou chak echantiyon anvan ajisteman pH.)
Metòd analitik inite dijesyon jelatin (GDU) - kont.
6. 0.100 N NaOH: (Achte estanda) a. Solisyon Stock: ofisyèl nan 0.100 N
E. Pwosedi:
1. Preparasyon anzim:
a. Kalkile Preparasyon anzim
Pwa {{0}}/Sib aktivite (apeprè 0.05 g oswa 50 mg)
A. Peze anzim nan jisteman nan flakon volumétrique 50 ml
B. Ajoute 8.3 ml solisyon tanpon.
b. Kite kanpe pou 30 minit nan tanperati chanm.
C. Dilye a 50 ml lè l sèvi avèk dlo distile pH 4.5, ajoute yon ti bar brase epi brase pou yon lòt 10 a 15 minit.
2. Pwosedi anzim:
a. Pipete 25 ml substrate Jelatin nan chak nan de 100 ml gode ki gen ba brase epi mete yo nan yon beny dlo a 45 degre pou 5 minit, youn pou Solisyon Tès la ak lòt la pou Solisyon Vid la.
b. Solisyon tès:
1) Ajoute 1.0 ml solisyon poud anzim bromelain nan gode ki deziyen pou solisyon tès la, kòmanse distribisyon ak toubiyon.
2) Apre egzakteman 20 minit enkubasyon a 45 degre, ajoute 0.1 ml 3 pousan oksijene idwojèn epi toubiyon.
3) Enkube pou yon lòt 5 minit.
4) Retire gode a nan beny dlo a epi ak brase konstan mete sond pH la.
5) Ekri pH la apre 10 segonn (Inisyal pH)
6) Ajiste pH 6.0 ak 0.1 N NaOH. (Apeprè 2-4 ml)
*Remak: Lè w ap ajiste pH la a 6. 0 pran prekosyon nan pH 5.8; pH la ogmante tou dousman ak ajoute minit nan NaOH nan pwen sa a pral siyifikativman ogmante pH la.
7) Kontinye ajitasyon konstan, ajoute 10 ml 37 pousan fòmaldeyid pH 9.0.
8) Ekri pH la apre 10 segonn ak 1 minit.
9) Titre a pH 9.0 ak 0.1 N NaOH.
10) Ekri volim titrasyon an.
Sa a se tit tès la, T. c.
Solisyon Vid: Solisyon Vid la ta dwe kouri ansanm ak solisyon Tès la. Sa a se akonpli lè w kòmanse detèminasyon Solisyon Vid la 12 minit apre Solisyon Tès la kòmanse. Sa ba ou tan pou w konplete tès Solisyon Tès la anvan w oblije kontinye ak Solisyon Vid la. 1) Ajoute 0.1 ml 3 pousan oksijene idwojèn nan gode ki deziyen pou solisyon vid la ak toubiyon.
2) Apre egzakteman 20 minit enkubasyon nan 45 degre, ajoute 1.0 ml solisyon bromelain ak toubiyon.
3) Enkube pou yon lòt 5 minit.
JELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL METHOD (GDU) - kont.
4) Retire gode a nan beny dlo a epi ak brase konstan mete sond pH la.
5) Ekri pH la apre 10 segonn (Inisyal pH)
6) Ajiste pH 6.0 ak 0.1 N NaOH. (Apeprè 2-4 ml)*Gade Nòt pi wo a.
7) Kontinye ajitasyon konstan, ajoute 10 ml 37 pousan fòmaldeyid pH 9.0.
8) Ekri pH la apre 10 segonn ak 1 minit.
9) Titre a pH 9.0 ak 0.1 N NaOH.
10) Ekri volim titrasyon an. Sa a se tit vid la, B.
F. Kalkil:
1. Definisyon: Yon inite dijesyon jelatin se kantite anzim sa a ki pral libere, apre 20 minit dijesyon nan 45 degre, 1 mg nitwojèn amine nan yon solisyon jelatin estanda nan pH 4.5 oswa pH 5.5 (GDU pH 4.5 oswa pH 5.5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Ki kote: T=Tit tès (ml 0.1 N NaOH) B=Tit vid (ml 0.1 N NaOH) N=Nòmalite NaOH ofisyèl (sa vle di 0.100) Wt (g)=Pwa inisyal anzim
G. Paramèt tès yo:
1. Preparasyon anzim yo dilye nan yon konsantrasyon apeprè 0.001 g/ml (1 mg/ml) oswa pou poud anzim bromelain konsantre apeprè 1-2 GDU/ml. Yo teste yon Materyèl Referans ak chak kouri pou asire presizyon metòd la.
Guanjie bay poud bromelain esansyèl, lè l sèvi avèk metòd tès GDU. Pwosesis pwodiksyon nou an opere anba atelye estanda CGMP, lè l sèvi avèk twa liy pwodiksyon atravè de faktori, ak de laboratwa endepandan. Pou nenpòt kesyon konsènan pwodwi nou yo, tanpri kontakte nou naninfo@gybiotech.com.
