Bromelain anzim poud

● Nou itilize pi bon matyè premyè.

Jelatin DijesyonSijesyon Inite Analitik Metòd (GDU)

A. Objektif:

Pwosedi sa a itilize pou detèmine aktivite pwoteolitikBromelain anzim poud.

B. Ekipman:

1. pH Meter

2. Konstan Tanperati Dlo Bath nan 45.0 degre ± 0.1 degre

3. Balans analitik

4. Flakon volumétrique

5. Pipèt volumétrique

6. Revèy

7. Digital Burette (Presizyon nan 0.1 ml)

8. Hood lafimen

9. Pipèt otomatik yo

C. Sekirite Prekosyon: Sa a tès dwe dwe fè nan la lafimen kapot.

1. Itilize pratik sekirite estanda nan laboratwa.

2. Fòmaldeyid: Prepare epi kenbe nan yon hotte afimen tout tan. Li te ye kanserojèn ak teratogen.

3. Oksijene: Oksidan fò

D. Reyaktif epi Reyaktif preparasyon:

1. Distile dlo: apeprè 500 ml: ajiste nan yon pH 4.5 ak 0.1 N HCI.

2. Jelatin substra:

a. Fonn 25 gram jelatin (Mikrobiologie. 1.04070) nan 375 ml dlo cho, pote nan yon bouyi. Fre a 45 degre.

b. Ajiste pH la a 4.5 ak 0.1 N HCI epi delye nan 500 ml pH 4.5 dlo distile.

c. Kenbe substrate jelatin nan 45 degre.

3. Tanpon Solisyon:

a. Ajoute 15 g NaCl tou dousman nan 40-50 ml dlo nan yon beak 150ml epi brase pou fonn.

b. Ajoute 0.570 ml asid acetic.

c. Ajiste pH la a 4.5 ak 0.2N HCL (volim pral pi gran pase 100ml.)

4. 3 % Idwojèn oksijene:

a. Pipète 2.5 ml 30% oksijene idwojèn (solisyon stock) nan yon volumetrik 25 ml.

flacon epi delye nan volim ak pH 4.5 dlo distile

5. 37 % Fòmaldeyid pH 9.0:

a. Ajiste yon volim ase (100 ml) fòmaldeyid a pH 9.0 ak 0.1 N NaOH (apeprè 20 ml).bromelain anzim poudfòmaldeyid pou chak echantiyon anvan ajisteman pH.)

6. 0.100 N NaOH: (Achte estanda)

a. Solisyon Stock: ofisyèl nan 0.100 N

E. Pwosedi:

1. Preparasyon anzim:

a. Kalkile Preparasyon anzim

Pwa=100/Sib aktivite (apeprè 0.05 g oswa 50 mg)

A. Peze anzim nan jisteman nan flakon volumétrique 50 ml

B. Ajoute 8.3 ml solisyon tanpon.

b. Kite kanpe pou 30 minit nan tanperati chanm.

c. Delye nan 50 ml lè l sèvi avèk dlo distile pH 4.5, ajoute yon ti bar brase epi brase pou yon

plis 10 a 15 minit

2. Pwosedi anzim:

a. Pipete 25 ml substrate Jelatin nan chak nan de 100 ml gode ki gen ba brase epi mete yo nan yon beny dlo a 45 degre pou 5 minit, youn pou Solisyon Tès la ak lòt la pou Solisyon Vid la.

b. Solisyon tès:

1) Ajoute 1.0 ml deBromelain anzim poudsolisyon an nan gode a ki deziyen pou solisyon tès la, kòmanse distribisyon ak toubiyon.

2) Apre egzakteman 20 minit enkubasyon nan 45 degre, ajoute 0.1 ml 3% oksijene idwojèn ak toubiyon.

3) Enkube pou yon lòt 5 minit.

4) Retire gode a nan beny dlo a epi ak brase konstan mete sond pH la.

5) Ekri pH la apre 10 segonn (Inisyal pH)

6) Ajiste pH 6.0 ak 0.1 N NaOH. (Apeprè 2-4 ml)

*Remak: Lè w ap ajiste pH la a 6.0, dwe fè atansyon nan pH 5.8; pH la ogmante tou dousman ak ajoute minit nan NaOH nan pwen sa a pral siyifikativman ogmante pH la.

7) Kontinye brase konstan, ajoute 10 ml fòmaldeyid 37% pH 9.0.

8) Ekri pH la apre 10 segonn ak 1 minit.

9) Titre a pH 9.0 ak 0.1 N NaOH.

10) Ekri volim titrasyon an. Sa a se tit tès la, T.

c. Solisyon vid:

Solisyon Vid la ta dwe kouri ansanm ak solisyon Tès la. Sa a se akonpli lè w kòmanse detèminasyon Solisyon Vid la 12 minit apre Solisyon Tès la kòmanse. Sa ba ou tan pou w konplete tès Solisyon Tès la anvan w oblije kontinye ak Solisyon Vid la.

1) Ajoute 0.1 ml 3% oksijene idwojèn nan gode a ki deziyen pou solisyon vid la ak toubiyon.

2) Apre egzakteman 20 minit nan enkubasyon nan 45 degre ajoute 1.0 ml nanbromelain anzim poudsolisyon ak toubiyon.

3) Enkube pou yon lòt 5 minit.